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梯度洗脱怎么设置(梯度洗脱怎么设置流动相条件)

2023-09-23 19:39:00

优点

而梯度洗脱能够规避掉等度洗脱的问题，峰型得到改，很少拖尾。例如梯度洗脱的样品峰，无论先出峰还是后出峰的组分，它们的峰形基本能保尖锐对称。

其次由于梯度洗脱通常设置的流动相比例是让洗脱强度越来越强，这样能保在较短的时间内，让样品中强保留组分也能被洗脱出来。

液相色谱有正相和反相之分。正相色谱和反相色谱还有吸附色谱和极性化学键键合色谱之分。如果采用固定相的极性大于流动相的极性，就称为正相色谱；如果固定相的极性小于流动相的极性，则称为反相色谱。

在液质联用中，一般均使用极性溶剂进行洗脱。反相色谱中洗脱强度顺序为：水<甲醇<乙腈<乙醇≈丙酮，亲水作用色谱中洗脱强度顺序为：丙酮<乙腈<乙醇<甲醇<水。通常可以通过改变流动相的溶剂强度和类型来改善化合物的保留和选择性。

安捷伦液相设置梯度洗脱程序，首先，前提是你必须要有双泵或者四元泵，才能梯度洗脱其次，不管是哪种仪器都是在泵控制里面去设置，这样设置梯度洗脱程序。

设置不同时间段，有机溶剂比例。最终还要回到初始比例。

流动相由几种不同极性的溶剂组成，通过改变流动相中各溶剂组成的比例改变流动相的极性，使每个流出的组分都有合适的容量因子k，并使样品中的所有组分可在最短时间内实现最佳分离。

具体地讲，当样品随梯度起点的流动相进入色谱柱入口时，由于起点流动相中强洗脱溶剂B含量较低，化合物C1(保留性适中)和化合物C2(保留较强)因分配系数(k值)较高而滞留于色谱柱入口附近，几乎未移动

梯度就是两个泵，不过岛津的泵买的话，估计不好单买，价格挺高的，今年还听说岛津的价格涨了不少，建议的话，可以直接买个国产的泵用用。

尿素在纯化包涵体时用，一般用8M的尿素加到含有咪唑的磷酸缓冲液中，纯化可溶性蛋白时不用加尿素。

洗杂蛋白时咪唑的浓度一般是20mM。洗脱目的蛋白时咪唑浓度在500mM时能将大部分蛋白都洗脱下来，如果想让蛋白纯度高的话，可以用不同的咪唑浓度，设置成梯度进行洗脱，我们实验室一般是80mM，100mM，200mM，500mM，但是用梯度洗脱有个缺点就是可能你的目的蛋白被稀释，浓度降低。